Repiquage de cellules sous PSM

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Analyse de la situation de travail

1. Observer et décrire avec précision la situation de travail en utilisant, par exemple, comme méthodes :
   • - 5M : Main d'oeuvre, Milieu, Méthode, Matériel, Matière,
   • - ITMaMi : Individus, Tâche, Matériel, Milieu ….
2. Lister les dangers spécifiques à la situation de travail.

Démarche de prévention du risque biologique

3. Repérer dans la chaîne de transmission : agent(s) biologique(s) et réservoir(s), voie(s) d’exposition.
4. Lister le (les) dommage(s) possible(s).
5. Identifier la (les) situation(s) exposante(s) au danger.
6. Identifier le (les) évènement(s) déclencheur(s).
7. Proposer des mesures de prévention : intrinsèque, collective, individuelle, instruction / information / formation.

Analyse globale de la situation de travail

Description de la situation de travail (méthode des 5M)

• Main d’œuvre : Damien, étudiant de première année en BTS Biotechnologies
• Milieu : laboratoire d’enseignement de confinement 2
• Méthode : repiquage d’un flacon de culture de cellules adhérentes par décollement à l’aide de trypsine-EDTA et arrêt du décollement avec du DMEM complet
• Matériel :
  • - Matériel à usage unique (flacon de culture, tube à hémolyse, pipettes, hématimètre)
  • - Matériel réutilisable : auxiliaire de pipetage
  • - Milieu DMEM complet (DMEM + glutamine + pénicilline + sérum de veau fœtal), trypsine EDTA
  • - Matériel d’analyse : étuve à CO₂, microscope inversé, poste de sécurité microbiologique (PSM)
  • - Essuie tout à usage unique
  • - Détergent désinfectant
  • - Conteneur à DASRI (Déchet d’activités de soins à risque infectieux)
• Matière : culture de cellules Vero à confluence

Identification des dangers spécifiques de la situation de travail

• Danger biologique : agents biologiques pathogènes potentiellement présents dans la culture de cellules et dans le sérum de veau fœtal

Démarche de prévention du risque biologique

Repérage dans la chaîne de transmission

• Agents biologiques :
  • - transmissibles par des cultures de cellules simiennes : même si les cellules Vero sont exemptes de virus, la probabilité de multiplication d’agents biologiques contaminants au sein de la culture est difficile à évaluer
  • - potentiellement contenus dans le sérum de veau fœtal (dont prions)
• Réservoirs : cellules en culture, surnageant de culture, DMEM complet
• Voies d’exposition : selon le virus contaminant
• - cutanéo-muqueuse
• - digestive
• - aéroportée

Identification de la (des) situation (s) exposante(s) au danger

• Gestion du flacon de culture: transport, ouverture
• Prélèvement du surnageant ou des cellules en suspension
• Dénombrement des cellules
• Élimination des déchets : pipettes, flacon, tube etc…
• Nettoyage désinfection des objets réutilisables et du plan de travail

Identification du (des) évènement(s) déclencheur(s)

• Contacts cutanés avec le surnageant de culture ou les cellules en suspension
  • - projeté lors de l’ouverture du flacon
  • - présent accidentellement sur l’extérieur du flacon de culture, sur la paillasse, le matériel, les gants et les déchets (papier d’essuyage)

Identification du (des) dommage(s)

• Maladies infectieuses
• Encéphalopathies spongiformes bovines

Proposition de mesures de prévention

• Protection intrinsèque :
• - Utilisation de produit et matériel adaptés : sérum de veau fœtal stérilisé (vérifier la fiche de données sécurité), pipettes en plastique à usage unique, hématimètre à usage unique et auxiliaire de pipetage dédié et désinfecté avant l’introduction sous le PSM
• - Utilisation de gestes et techniques adaptés
• - Aménagement de l’espace de travail (étuve, microscope et PSM à proximité)
• Protection collective :
• - Nettoyage et désinfection du PSM et du matériel avant et après manipulation (pour éviter la contamination des cultures par des virus)
• - Utilisation de PSM et d’étuve différents pour le repiquage de cellules et pour la manipulation de microorganismes
• - Tri et gestion adaptés des déchets contaminés par la filière DASRI
• Protection individuelle :
• - Élimination immédiate des déchets contaminés (effluents, pipettes) dans le conteneur à DASRI placé sous le PSM
• - Lavage des mains en cas de contact cutané
• Instruction / Information / Formation :
• - Formation à la démarche de prévention des risques biologiques
• - Mise à disposition et respect de la procédure «Gestion des déchets»
• - Mise à disposition de la procédure «Conduite à tenir en cas d’exposition à des produits biologiques contaminants»