Réalisation de dilutions décimales d’une suspension à dénombrer

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Analyse de la situation de travail

1. Observer et décrire avec précision la situation de travail en utilisant, par exemple, comme méthodes :
   • - 5M : Main d'oeuvre, Milieu, Méthode, Matériel, Matière,
   • - ITMaMi : Individus, Tâche, Matériel, Milieu ….
2. Lister les dangers spécifiques à la situation de travail.

Démarche de prévention du risque biologique

3. Repérer dans la chaîne de transmission : agent(s) biologique(s) et réservoir(s), voie(s) d’exposition.
4. Identifier la (les) situation(s) exposante(s) au danger.
5. Identifier le (les) évènement(s) déclencheur(s).
6. Lister le (les) dommage(s) possible(s).
7. Proposer des mesures de prévention : intrinsèque, collective, individuelle, instruction / information / formation.

Analyse globale de la situation de travail

Description de la situation de travail (méthode des 5M)

• Main d’œuvre : Jean, étudiant en section de technicien supérieur
• Milieu : laboratoire d’enseignement de confinement 2
• Méthode : réalisation d’ensemencement dans la masse à partir de dilutions successives du bouillon de culture préalablement réalisées
• Matériel :
  • - Pipettes graduées stériles en plastique à usage unique et dispositif d’aspiration associé (ou pipette à piston et cônes stériles associés)
  • - Bec chauffant
  • - Agitateur
  • - Milieu de culture en surfusion
  • - Boites de Pétri
  • - Essuie tout à usage unique
  • - Détergent désinfectant
  • - Conteneur à DASRI (Déchet d’activités de soins à risque infectieux)
• Matière : dilutions décimales d’une culture bactérienne à dénombrer

Identification des dangers spécifiques de la situation de travail

• Danger biologique : agents biologiques pathogènes présents dans le bouillon de culture à dénombrer
• Danger physique : chaleur dégagée par le bec chauffant et les milieux en surfusion

Démarche de prévention du risque biologique

Repérage dans la chaîne de transmission

• Agents biologiques : bactéries présentes dans les dilutions décimales
• Réservoirs : dilutions à dénombrer
• Voies d’exposition :
• - Voie respiratoire si la bactérie est à transmission aéroportée
• - Voie cutanéo-muqueuse
• - Voie digestive

Identification de la (des) situation (s) exposante(s) au danger

• Ouverture des tubes contenant les dilutions décimales après leur homogénéisation
• Prélèvement du volume de suspension
• Rejet du volume aspiré dans une boite de Pétri
• Élimination de la pipette (ou du cône) dans le conteneur à DASRI
• Ajout du milieu en surfusion

Identification du (des) évènement(s) déclencheur(s)

• Inhalation d’aérosols créés lors de l’homogénéisation de la suspension bactérienne ou lors du prélèvement de la suspension, suite aux aspirations/refoulements
• Projections de suspension bactérienne sur la peau et/ou les muqueuses lors du rejet du prélèvement dans la boite de Pétri ou lors de l’élimination de la pipette ou du cône dans le conteneur à DASRI
• Contact avec du milieu ensemencé encore liquide lors de déplacements éventuels des boites

Identification du (des) dommage(s)

• Infection bactérienne induite par l’agent biologique contenu dans le bouillon de culture

Proposition de mesures de prévention

• Protection intrinsèque :
• - Suppression, si possible, du danger en travaillant sur un bouillon contenant un agent biologique de groupe 1
• - Qualité du dispositif d’aspiration pour empêcher les projections du produit biologique lors du transvasement du volume de suspension dans le tube de diluant
• Protection collective :
• - Réalisation de la manipulation sous PSM si le bouillon de culture est susceptible de contenir un agent biologique pathogène à transmission aéroportée
• - Nettoyage et désinfection régulières du plan de travail
• - Tri et gestion adaptés des déchets
• Protection individuelle :
• - Gestuelle adaptée avec limitation des aérosols par agitation limitée et attente quelques secondes avant ouverture du tube et lors des aspirations/refoulements
• - Élimination immédiate de la pipette (ou le cône) dans le conteneur à DASRI situé à proximité du poste
• - Attente de la solidification des milieux avant de déplacer les boites ensemencées
• - Aucun port d’objet ou de mains à la bouche
• - Lavage des mains
• Instruction / Information / Formation :
• - Formation à la démarche de prévention des risques biologiques
• - Mise à disposition et respect de la procédure «Gestion des déchets»
• - Mise à disposition de la procédure «Conduite à tenir en cas d’exposition à des produits biologiques contaminants»